Frecuencia de transcritos BCR/ABL p210 en 272 pacientes con leucemia mieloide crónica (LMC) en Bolivia / Frequency of p210 BCR-ABL transcripts in 272 Bolivian patients with chronic myeloid leukemia (CML)

INTRODUCCIÓN: existen dos formas principales del gen de fusión BCR/ABL, que involucra al exón 2 del gen ABL y a diferentes exones del gen BCR; los transcritos b2a2 o b3a2 codifican a la proteína p210, mientras que, el transcrito e1a2 codifica a la proteína p190. En Bolivia, no existe información sobre la frecuencia de estas isoformas (BCR/ABL quimérico) en pacientes con leucemia mieloide crónica (LMC). Objetivo.- Determinar la frecuencia de co-expresión de los transcritos p210 en pacientes con LMC de Bolivia. MATERIAL Y MÉTODO: se estudió 272 pacientes diagnosticados con LMC, entre julio del 1999 a agosto del 2015. Se realizó pruebas de RT-PCR (reverse transcriptase polymerase chain reaction) en muestras de médula ósea y sangre periférica de pacientes adultos y pediátricos con diagnóstico de LMC, positivos para algún tipo de reordenamiento BCR/ABL. RESULTADOS: la expresión del transcrito b2a2 se encontró en 96 pacientes (35,3%), el trascrito b3a2 en 154 casos (56,6%) y ambos transcritos en 22 pacientes (8,1%). Se realizó análisis de supervivencia, donde se observó que a los 5 años la tasa de sobrevida fue 64%; y la sobrevida libre de progresión 42%. También se observó que el tipo de transcrito no influye en la sobrevida total ni en la sobrevida libre de enfermedad. CONCLUSIÓN: se evidenció que no existen diferencias significativas de la expresión de los diferentes transcritos BCR/ABL de los pacientes estudiados en relación a otros estudios reportados.

There are two main forms of BCR/ABL fusion gene, involving exon 2 of ABL gene and different exons of the BCR gene, the transcripts b2a2 or b3a2 code for a p210 protein, and the transcript e1a2 code a p190 protein. In Bolivia, there is no information about the frequency of these isoforms of chimeric gene BCR/ABL in chronic myeloid leukemia (CML). The present study was designed to determine the frequency of co-expression of p210 transcripts in 272 patients with CML. It was conducted reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) tests in samples of bone marrow and peripheral blood of adult and pediatric patients with CML diagnosis, positive for some kind of BCR/ABL rearrangement. The transcript b2a2 was found in 96 (35,3%) patients; and b3a2 transcript in 154 (56.6%) cases; whereas, in 22 (8.1%) patients both transcripts were detected. Survival analysis was performed, it was observed that to 5 years the overall survival (OS) was 64%, and the progression free survival (PFS) was 42%. It was also observed that the type of transcript does not affect OS and PFS. Statistical analysis of our study, displayed no significant differences in the expression of different transcripts BCR/ABL of the Bolivian population, in relation to studies reported in other populations.

Terapia celular para el tratamiento de úlceras crónicas / Cell therapy in chronic ulcers treatment

INTRODUCCIÓN: las úlceras por presión son producto de una necrosis isquémica en la piel y tejido subcutáneo, se presentan en pacientes inmovilizados por etiología diversa, y en estadios avanzados incrementan la mortalidad. La terapia celular con Células Madre Somáticas, que se diferencian y proliferan a células maduras funcionalmente normales, tiene la finalidad de reparar la función de tejidos lesionados. OBJETIVO: Evidenciar la eficacia de las Células Madre Somáticas de médula ósea en la reparación de úlceras crónicas por presión, como una posibilidad terapéutica en los tratamientos convencionales no exitosos. MÉTODO: Se estudió 4 pacientes con úlceras crónicas por presión en estadios avanzados y refractarias a tratamiento convencional. Se obtuvo Células Madre Somáticas de la médula ósea del esternón, y se procedió al sembrado de las mismas una vez por semana. Resultados.- Las Células Madre Somáticas sembradas en las úlceras crónicas se diferenciaron en tejido muscular, conjuntivo, subcutáneo y epitelial en un periodo comprendido entre 30 a 69 días. CONCLUSIÓN: la terapia celular con Células Madre Somáticas de médula ósea se constituye en una posibilidad terapéutica en úlceras crónicas de estadios avanzados y refractarias a tratamiento convencional.

INTRODUCTION: chronic pressure ulcers result from an ischemic necrosis of the skin and subcutaneous tissue. This type of ulcers occurs in patients physically restrained by different etiology and in advanced stages increase mortality. Cell therapy allows to regenerate the function of injured tissues by using somatic stem cells that differentiate and proliferate into mature cells on order to repair injured tissues. OBJECTIVE: to demonstrate the effectiveness ofusing Somatic Stem Cells obtained from bone marrow in chronic pressure ulcers treatment, as a likely therapeutic option to unsuccessful conventional treatments. METHOD: it was studied 4 patients with chronic pressure ulcers in advanced stages and refractory to conventional treatment. It was obtained Somatic Stem Cells from the bone marrow and followed a process of seeding on a weekly basis. RESULTS: somatic Stem Cells seeded in chronic pressure ulcers differentiated into muscle, connective, epithelial and subcutaneous tissues. The repair of injured tissues lasted between 30 to 69 days. CONCLUSION: cell therapy by using Somatic Stem Cells from bone marrow constitutes a therapeutic option in chronic ulcers of advanced stages and refractory to conventional treatment.

Leucemia mieloide crónica en niño de 2 años. Reporte de caso / Chronic myelogenous leukemia in a 2 year-old boy. Case report

La leucemia mieloide crónica (LMC) representa el 3% de las leucemias pediátricas diagnosticadas y su incidencia es de 0,7 millones por año, extremadamente rara entre las edades de 1 a 14 años y debido a esta inusual presentación existen pocos casos descritos. La patogénesis molecular de la LMC implica la fusión quimérica de la proteína BCR-ABL, cuyo aumento constitutivo de la actividad tirosina quinasa, contribuido por el componente ABL, parece ser el causante de la alteración molecular en la LMC. La identificación de esta proteína quimérica resultó en el desarrollo exitoso del mesilato de imatinib, fármaco que ha revolucionado el tratamiento de esta enfermedad. El tratamiento con imatinib en niños ha logrado alcanzar un 90% de remisión completa a los 5 años, sustituyendo de esta manera al trasplante alogénico como primera línea de terapia. A continuación reportamos el caso de un niño de 2 años cuyo hemograma reportó: anemia microcítica moderada (hemoglobina de 11,7 g%), hiperleucocitosis (leucocitos 80,8 x10(9)/L), y trombocitosis (721x10(9)/L). Los estudios de citogenética, FISH y RT-PCR para BCR-ABL1 dieron positivos, confirmando el diagnóstico de LMC en fase crónica. Se inició inmediatamente el tratamiento con imatinib y a 3 años del diagnóstico el paciente se encuentra en remisión completa a nivel molecular, con ausencia del clon neoplásico y sin haber presentado efectos colaterales adversos de importancia.

Chronic myeloid leukemia (CML) accounts for 3% of all diagnosed pediatric leukemias. It has an incidence of 0.7 million per year, rarely diagnosed between the ages of 1 to 14 years, so few cases have been reported. The CML molecular pathogenesis involves a chimeric fusion of the BCR-ABL protein which increased constitutive tyrosine kinase activity contributed by ABL component seems to be the cause of the molecular alteration in CML. The identification of this chimeric protein resulted in the successful development of imatinib mesylate, a drug that has revolutionized the treatment of this disease. The use of imatinib in children has reached 90% of complete remission at 5 years, replacing in this way the allogeneic transplant as first-line therapy. This report presents the case of a 2 year old child whose CBC reported: moderate microcytic anemia (hemoglobin 11.7 g%), hyperleukocytosis (leukocytes 80.8 x10(9)/L) and thrombocytosis (721x10(9)/ L). Cytogenetic, FISH and RT-PCR Studies for BCR-ABL1 were positive, confirming the diagnosis of CML in chronic phase. Treatment with imatinib was initiated immediately and 3 years after diagnosis the patient is in complete molecular remission with the absence of neoplastic clone and without having presented significant side effects.

Leucemia bifenotípica aguda B/T: presentación de caso clínico / Biphenotypic acute leukemia: case report

La leucemia bifenotípica aguda (LBA) es una enfermedad poco frecuente que comprende alrededor de 2 al 5% del total de casos de todas las leucemias. La LBA se caracteriza por la expresión asociada de 2 o más marcadores de diferentes líneas celulares en la población celular de blastos. Al respecto, la clasificación de neoplasias hematológicas y linfoides realizada por la OMS el 2008, incorporó los criterios de EGIL para el diagnóstico de este tipo de leucemia. La leucemia bifenotípica, que muestra fenotipos B y T es extremadamente rara y de mal pronóstico por lo que existe poca información respecto al manejo clínico de estos pacientes. Actualmente no existe un tratamiento estándar para estos casos, ya que no se pueden realizar estudios clínicos aleatorizados debido a la baja incidencia de la LBA. Sin embargo, el uso del protocolo Hiper CVAD (hiperfraccionamiento de ciclofosfamida, vincristina, adriamicina y dexametasona; y altas dosis de citarabina y metotrexato) ha logrado un 78% de remisión completa y una media de duración de sobrevivencia de 27 meses. Recientemente la incorporación de inhibidores de la tirosina kinasa (imatinib, nilotinib o dasatinib) en combinación con el protocolo hiperCVAD ha mejorado la tasa de remisión completa durante la inducción. En este trabajo reportamos el caso de un paciente diagnosticado con leucemia bifenotípica B/T cuya población clonal presentó positividad para marcadores linfoides, obteniéndose una puntuación de 6,5 para el linaje B y 4,5 para el linaje T según los criterios de EGIL.

Biphenotypic acute leukemia (BAL) is an uncommon disease comprising approximately from 2 to 5% of all leukemia cases. BAL is characterized by the associated expression of two or more markers of different cell lines in a single blasts population. In this regard, 2008 WHO Classification of Tumors of Hematopoietic and Lymphoid Tissues included EGIL score system for diagnosing this type of leukemia. The biphenotypic leukemia that expresses B and T phenotypes is extremely unusual and it has poor prognosis. Due to low incidence of BAL, it is not possible to conduct randomized trials and consequently little is known about the clinical management of this kind of patients. Currently, there is no a standard treatment for these cases. However, the use of Hyper-CVAD regimen (hyperfractionated of cyclophosphamide, vincristine, adriamycin, and dexamethasone; and high dose of methotrexate and cytarabine) has achieved a 78% of complete remission with an average survival of 27 months; and the incorporation of tyrosine kinase inhibitors (imatinib, nilotinib or dasatinib) has improved the remission rate during induction. We report the case of a patient whose clones gave positive for B and T lymphoid markers and according to EGIL score system, it was obtained 6.5 for B lineage and 4.5 for Tlineage

Eritrocitosis patológica de altura: caracterización biológica, diagnóstico y tratamiento / High alitude patthological erythrocytosis: biological characterization, diagnosis and treatmnnt

Introducción. Los pobladores de grandes alturas se adaptaron de modo diferentes, siguiendo rutas distintas con el mismo objetivo de suministro de oxígeno y la supervivencia. En el presente trabajo se caracteriza la Eritrocitosis Patológica de Altura y se demuestra la eficacia de la atorvastatina en el tratamiento. Material y métodos. Se estudiaron: Sujetos varones como Controles Normales (CN), y pacientes con Eritrocitosis Patológica de Altura (EPA), Eritrocitosis Secundaria (ES) y Policitemia Vera (PV). Se realizaron estudios de laboratorio y de biología molecular. Se realizó estudio clínico de fase 2 con atorvastatina. Resultados. La EPA presenta: eritropoyetina normal, apoptosis retardada de progenitores eritroides, crecimiento autónomo de BFU-E e hipersensibilidad a la eritropoyetina. La atorvastatina como tratamiento en pacientes con EPA disminuye la concentración de hemoglobina y remite la sintomatología de la hiperviscosidad sanguínea. Conclusiones. La EPA tiene características propias que la distinguen de otras eritrocitosis patológicas y la atorvastatina se constituye en tratamiento eficaz.

Introduction. The residents of high altitude get use to it in different ways, following the same purpose in order to supply oxygen and survival. In the present paper, we characterize the High Altitude Pathological Erythrocytosis disease and demonstrate the effectiveness of atorvastatin in its treatment. Material and methods. We studied male subjects as normal controls (CN), and patients with High Altitude Pathological Erythrocytosis (EPA), Secondary Erythrocytosis (ES) and Polycythemia Vera (PV). Laboratory and molecular biology studies were conducted. We developed in the study of 2nd phase with atorvastatin. Results. The EPA presents: normal erythropoietin, delayed erythroid progenitors apoptosis, autonomous growth of BFU-E and hypersensitivity to erythropoietin. The atorvastatin in patient with EPA, decreased hemoglobin concentration and eliminates the symptomatology of blood hyperviscosity Conclusions. The EPA has characteristics that distinguish it from other pathologic erythrocytosis and atorvastatin becomes an effective treatment.

Mecanismo molecllar de las estatinas en el tratamiento de la eritrocitosis patoológica de altura / Molecular mechanism of statins in the treatment of high altitude pathological erythroyytosis

Introducción La Eritrocitosis Patológica de Altura es la manifestación hematológica de la Enfermedad Crónica de Altura, por adaptación inadecuada a grandes alturas de genes reguladores de la eritropoyesis. Las estatinas son inhibidores de la vía del mevalonato involucrado en la regulación de la eritropoyesis. El presente trabajo describe los mecanismos moleculares de la inhibición de la eritropoyesis en pacientes con eritrocitosis patológicas. Material y métodos Se estudiaron 35 pacientes con eritrocitosis patológicas con radicatorias en las ciudades de La Paz y El Alto (3600 y 4000 msnm respectivamente). Se realizaron Cultivo de células progenitoras hematopoyéticas y Western Blot. Resultados Statins induce apoptosis of erythroid progenitors in the cell culture medium. Without the supplement of simvastatin the apoptosis was 12.3% and With simvastatin the apoptosis was 38.4% (p = 0.001). Furthermore statins inhibit the proliferation and differentiation of erythroid progenitors. Conclusiones Los mecanismos moleculares involucrados en la inhibición de la eritropoyesis son: a) Bloqueo de la isoprenilación de Rho y Ras, b) Inhibición de la fosforilación de Jak-2 y Stat-5, c) inhibición de la glicosilación del EpoR, d) Disminución de colesterol en microdominios de la membrana celular (raft lipid), e) Inducción de apoptosis a través de BCLxL y caspasa 9.

Introduction The High altitude Pathological Erythrocytosis is the chronic mountain sickness hematologic manifestation by inadequate adaptation to high altitudes of genes regulating erythropoiesis. Statins are inhibitors of the mevalonate pathway involved in the regulation of erythropoiesis. This paper describes the molecular mechanisms of erythropoiesis inhibitionin patients with pathological erythrocytosis. Material and methods We studied 35 patients with pathological erythrocytosis from La Paz and El Alto city (3600 and 4000 masl respectively). Were performed hematopoietic progenitor cell culture and Western blotting. Results Statins induce apoptosis in liquid culture medium. without simvastatin erythroid progenitors from apoptosis presentarón and 12.3% in the group supplemented with simvastatin 38.4% apoptosis (p = 0.001), statins also inhibit the proliferation and differentiation of erythroid progenitors, and inhibit transcription of STAT-5. Conclusions The molecular mechanisms involved in the erythropoiesis inhibition are: a) Inhibition of Ras and Rho isoprenylation, b) Inhibition of Jak-2 and Stat-5 phosphorylation, c) inhibition of EpoR glycosylation, d) Statins reduce lipid rafts cholesterol and reduce JAK2 localization to lipid rafts, e) Induction of apoptosis through caspase 9 and BclxL.

Epidemiología de las leucemias en Bolivia: 1473 casos enero 1999 a mayo de 2012 / Epidemiology of leukemias in Bolivia: 1473 cases from January 1999 to May 2012

Introducción La leucemia es la neoplasia hematológica más frecuente, su incidencia se ha incrementado en diferentes regiones del mundo. Bolivia está experimentando el fenómeno de la "transición epidemiológica", de una alta incidencia de enfermedades infecciosas a una creciente prevalencia de las enfermedades oncológicas. El presente trabajo describe las características epidemiológicas de las leucemias en Bolivia. Métodos Se analizaron los datos epidemiológicos y resultados de diagnósticos de 1473 muestras de pacientes con leucemia procedentes de diferentes Centros Oncohematológicos de Bolivia, en fechas comprendidas entre enero de 1999 a mayo de 2012. Todas las muestras fueron evaluadas con estudio morfológico e inmunofenotípico. Los diagnósticos de Leucemia Mieloide Crónica y Leucemia Mieloide Aguda M3 fueron confirmados con estudios biomoleculares. Resultados Los pacientes fueron divididos en dos grupos: Se consideraron pacientes pediátricos a menores de 18 años y pacientes adultos a mayores de 18 años y un día. De los 1473 pacientes con leucemia, 896 (61%) fueron niños y 577 (39%) fueron adultos. De los pacientes pediátricos 47% fueron niñas y 53% fueron niños. La distribución según diagnóstico fue la siguiente: Leucemia Linfoblástica Aguda 706 (79%), Leucemia Mieloblástica Aguda 172 (19%) y Leucemia Mieloide Crónica 18 (2%). De los pacientes adultos 43% fueron mujeres y 57% fueron varones. La distribución según diagnóstico fue la siguiente: Leucemia Linfoblástica Aguda 188 (33%), Leucemia Mieloblástica Aguda 176 (30%), Leucemia Linfocítica Crónica 31 (5%) y Leucemia Mieloide Crónica 182 (32%). Conclusión Los resultados obtenidos presentaron características epidemiológicas propias para Bolivia, probablemente por la estructura multiétnica, pluricultural y la expectativa de vida menor en relación a otros países.

Introduction Leukemia is the most common hematological neoplasm, their incidence was increased in different regions of the world. Bolivia is experiencing the phenomenon of "epidemiological transition", from a high incidence of infectious diseases to an increasing prevalence of oncological diseases. This paper describes the epidemiological features of leukemia in Bolivia. Methods Patients were grouped into two groups: The pediatric patients under 18 years and adult patients over 18 years and one day. We studied the diagnostic results and epidemiological data of 1473 samples of leukemia patients from different centers for oncohematologic disease of Bolivia, in dates between January 1999 to May 2012. All the samples were tested with morphologic and immunophenotypical studies. The diagnoses of Chronic Myeloid Leukemia and Acute Promyelocitic Leukemia (AML-M3) were confirmed with biomolecular studies. Results Of 1473 patients with leukemia, 896 (61%) were pediatric patients and 577 (39%) were adults patients. In pediatric patients were 47% girls and 53% were children. The distribution according to the diagnosis was the following: acute lymphoblastic leukemia 706 (79%), acute myeloblastic leukemia 172 (19%) and chronic myeloid leukemia 18 (2%). In adult patients 43% were women and 57% were male. The Distribution according to the diagnosis was the following: acute lymphoblastic leukemia 188 (33%), acute myeloblastic leukemia 176 (30%), chronic lymphocytic leukemia 31 (5%) and chronic myeloid leukemia 182 (32%). Conclusion The results obtained showed different epidemiological characteristics, probably due to the structure multiethnic, multicultural and lower life expectancy in relation to other countries.

UMSAgen, método para la extracción simultánea de RNA y DNA para diagnóstico molecular / UMSAgen, the method for simultaneous extraction RNA and DNA for molecular diagnostics

INTRODUCCIÓNEl RNA y el DNA son materiales genéticos de la célula cuya extracción es útil para la medicina moderna. Actualmente existen varios métodosde extracción de RNA y DNA por separado y a costos altos. En este trabajo se describe el método UMSAgen como alternativa para laextracción simultanea de RNA total y DNA genómico para diagnósticos moleculares. MATERIAL Y MÉTODOSSe obtuvieron veinte muestras de médula ósea de pacientes con leucemia mieloide crónica. Los leucocitos fueron separados de los glóbulosrojos con tampón de lisis. Aproximadamente 3 x 106 de células fueron lisadas en guanidio y conservadas a -20 ºC hasta el momento dela extracción del RNA y DNA. Se realizaron extracciones con 3 diferentes métodos: a) El método comercial Quiagen para el RNA total, b) elmétodo clásico fenol-cloroformo para el DNA genómico y c) el método UMSAgen para extracción simultanea de RNA y DNA. RESULTADOSLa pureza del RNA total y DNA genómico extraídos por el método UMSAgen es similar a la extraída con el Kit Quiagen para el RNA y latécnica clásica para el DNA. La evaluación realizada por electroforesis en agarosa y la amplifi cación del daño molecular BCR-ABL y JAK-2V617F, por RT-PCR y PCR respectivamente, fue exitosa. CONCLUSIÓNE: método UMSAgen es una alternativa fácil y económica para la extracción de RNA total y DNA genómico en diagnóstico e investigación molecular...

INTRODUCTION The RNA and the DNA are genetic materials of the cell. The RNA/DNA extraction is necessary in modern medicine. Several RNA/DNA isolation methods exist but they are very expensive and therefore not applicable in our country. In this work, we describe the UMSAgen method as an alternative for simultaneous total RNA and genomic DNA extraction for molecular diagnosis. MATERIAL AND METHODS Twenty bone marrow samples of chronic myeloid leukemia patients were obtained. The leukocytes were separated from the erythrocytes with lyses solution; 3x106 cells were lysed in guanidio solution and conserved at -20ºC until the extraction procedure.The extraction of nucleotide acids was realized by 3 different methods: a) commercial method QuiagenTM for RNA extraction, b) classic method (phenol/chloroform) for DNA extraction and c) UMSAgen method for simultaneous RNA/DNA extraction. The two fi rst methods were used as a control test for UMSAgen.RESULTS The quality and quantity of total RNA and genomic DNA obtained by the UMSAgen method were similar to that of the QuiagenTM Kit and the classic method, respectively. The ABL-BCR and JAK-2V617F amplifi cation by RT-PCR and PCR were successful. CONCLUSIONS The UMSAgen is an easy and inexpensive altrernative method for total RNA and genomic DNA extraction in diagnostic and biomolecular research.

Influencia de la altura en la eritropoyesis del recien nacido / Influence of the height in erythropoiesis newborn

Objetivo. Estudio de la influencia de la hipoxia de la altura sobre la eritropoyesis del recien nacido através del análisis de valores hematológicos. Población. Trescientas muestras de sangre venosa de cordon umbilical de niños nacidos vivos a término y 300 muestras de sangre venosa periférica de mujeres gestantes del Hospital de la Mujer de La Paz a 3600 msnm. Métodos. Los estudios se realizaron con contador automatico Micros 60 y por técnicas manuales. Resultados. Los valores hematológicos de las gestantes normales comparados con sus similares habitantes a nivel del mar son estadísticamente diferentes; mientras que los valores hematológicos de los recien nacidos en la altura comparados con los del nivel del mar, son estadísticamente similares. Conlusión. La eritropoyesis de los recien nacidos en la altura es independiente de los factores maternos y del ambiente hipóxico presente a 3600 msnm, probablemente por la función protectora que ejerce la placenta.

DNA-UMSAgen, extracción de DNA genómica para diagnóstico molecular: método rápido y económico / UMSAgen DNA, genomic DNA extraction for molecular diagnosis: rapid and economical method

Introducción. El estudio del ácido desoxirribunocleico (DNA) es imprescindible para la medicina moderna; por ello, se ha diseñado diferentes técnicas para su extracción, cuyos costos son altos y de tiempo prolongado. En este trabajo se describe un método modificado de extracción de DNA (DNA-UMSAgen) basado en la técnica de Miller. Métodos. Las células mononucleares fueron obtenidas de sangre venosa periférica de un sujeto voluntario, para realizar 40 extracciones de DNA; 20 con el método modificado DNA_UMSAgen y otros 20 con el método clásico. Posteriormente se evaluó la concentración, calidad y utilidad de estos DNA extraidos. Resultados. La pureza del DNA extraido por el método DNA-UMSAgen es de 1,88 similar al de la técnica clásica 1,91, las concentraciones obtenidas son 20,4 ug/106 cel y 56ug/106 cel respectivamente. La evaluación por electroforesis en agarosa y la amplificación del exon 12 del gen JAK2 por PCR fue satisfactoria. Conclusión. El método DNA-UMSAgen es una alternativa de extracción de DNA genómico, rápido y económico, adecuado para paises en vias de desarrollo.

INTRODUCTIONDNA is the genetic material of the cell. Actually for its study, laboratory techniques are available that require its extraction free of impurities. This paper describes the DNA-UMSAgen method as an alternative for DNA extraction which is based on the Miller technique.METHODSThe mononuclear cells were obtained of venous peripheral blood of a voluntary subject, for to realize 40 DNA's extractions; 20 with the modified method DNA-UMSAgen and other 20 with the classic method. Later there was evaluated the concentration, quality and utility of these extracted DNA.RESULTSThe DNA purity extracted by the DNA-UMSAgen method is 1,88 similar to the classic technique 1,91, the concentration obtained were 20,4 ug/106 cells and 56ug/106 cells respectively. The evaluation by agarose gel electrophoresis and the amplification of the exon 12 of the JAK2 gen by PCR was successful.CONCLUSIONThe DNA-UMSAgen extraction method is a very acceptable fast, easy and inexpensive alternative method for underdeveloped countries for DNA extraction.

Primera experiencia en aislamiento de celulas endoteliales humans en Bolivia / First experience in the isolation of human endothelian cells in Bolivia

INTRODUCCIÓN: las células endoteliales pueden proveer información valiosa con respecto a muchos procesos patológicos como la aterosclerosis, inflamación, neoplasia y angiogénesis. Este trabajo describe la primera experiencia boliviana en el aislamiento y cultivo de células endoteliales humanas derivadas de la vena umbilical (HUVEC). MÉTODOS: Un segmento largo de cordón umbilical se utilizó para el aislamiento y fue tratado por digestión con colagenasa. Las células endoteliales fueron desprendidas de la íntima y posteriormente cultivadas en medio de cultivo M199 y suero fetal bovino. Técnicas morfológicas, inmunohistoquímicas y de citometría de flujo fueron utilizadas para identificar estas células. RESULTADOS: Se examinaron las células endoteliales obtenidas por análisis morfológico e inmunohistoquímico. El marcaje con CD34 fue positivo para más del 90% de las células obtenidas por digestión con colagenasa analizado por citometría de flujo. CONCLUSIÓN Se logró aislar y cultivar HUVEC de manera exitosa. Una gran variedad de experimentos y aplicaciones en ciencias biomédicas pueden ser potencialmente factibles.

INTRODUCTION: endothelial cell study yields valuable information concerning many pathologic processes such as atherosclerosis, inflammation, neoplasia and angiogenesis. This paper describes the first Bolivian experience in isolation and culture of human umbilical vein endothelial cells (HUVEC). METHODS: a long segment of the umbilical cord was processed by collagenase digestion. Endothelial cells were detached from intima and further cultured using M199 culture media. Morphologic, immunochemistry and flow cytometry approaches were used to identify these cells. RESULTS: morphologic and immunochemistry analysis of the pool of obtained cells were positive for HUVEC. CD34 staining was positive in more than 90% of the cells obtained by collagenase digestion as assessed by flow cytometry. CONCLUSION: HUVEC were successfully isolated for the first time in Bolivia. A great deal of further experiments and applications in biomedical sciences is possible

Primeros transplantes de médula ósea en Bolivia / First transplants of medula osea in Bolivia

El trasplante de médula óasea es un procedimiento que ha mejorado la sobrevivencia libre de enfermedad de patologías oncohematológicas. El presente trabajo describe los primeros transplantes de médula ósea en Bolivia.En noviembre de 2002 se realizó en Bolivia el primer transplante alogénico de hermano consanguineo HLA compatible en pacientes de sexo masculino de 24 años de edad, con diagnóstico le leucemia mieloide crónica en fase crónica. El acondicionamiento fue con thiotepa, ciclofosfamida y fludarabina, seguido de transplante de 2.7 x 10 células mononucleadas por Kg/peso. Para profilaxis de rechazo al injerto (GVHD) recibió metotrexate, ciclosporina y metilprednisolona. Presentó GVHD grado I al día +13. La recuperación de neutrófilos mayor a 500/ml y plaquetas mayores a 20.000/ml fue al día +14. Actualmente (marzo 2004)el paciente esta libre de enfermedaad en remisión molecular completa. Otro paciente dae 40 años de edad, se sexo masculino, con diagnóstico de Linfoma linfoblástico con bulky abdominal, de alto riesgo realizó tratamiento poliquimioterápico según protocolo LLA-BOL2000Adulto (adriamicina, vincristina, dexametasona, ciclofisfamida, citarabina, etopósido, metotrexate y prednisona) logrando remisión parcial de bulky abdominal. En julio de 2002 se realizó la obtención de células progenitoras de tejido hematopoyético que fueron congeladas con DMSO a -80°C; seguido de acondicionamiento con protocolo BEAM (BCNU, etopósido, ara-C y melphalan) y reinfusión de 1.9 x10 células mononucleadas por Kg/peso. La recuperación de neutrófilos mayor a 500 /ml se presentó el día +14 y plaquetas mayor a 20.000/ml el día +12. Actualmente después de 21 meses, el paciente se encuentra sano libre de enfermedad.

Valores hematologicos en recien nacidos sanos habitantes de altura: 3600 msnm / Haematologic values in normal newborns at 3600 meters above sea level

Pregunta de investigación. ¿Cuáles son los valores normales hematológicos de sangre de cordón umbilical de recien nacidos sanos de altura habitantes a 3600 m.s.n.m. cuyas madres son atendidas en el Hospital de la mujer de la ciudad de La Paz durante la gestión 2002?. Objetivo general. Conocer los valores normales hematológicos de sangre de cordón umbilical (serie roja y serie blanca) de los recien nacidos sanos habitantes de 3600 msnm antendidos en el hospital de la Mujer durante la gestión 2002. Diseño. Para responder la pregunta de investigación y cumplir con los objetivos, se diseño un estudio de corte transversal. Contexto o lugar. el estudio fue realizado en un centro de referencia como es el Hospital de la Mujer y se procesaron las muestras en el laboratorio del Instituto de Genética. Pacientes. Recien nacidos atendidos en el Hospital de la Mujer, según tamaño de muestra calculado tomando encuesta un nivel de confianza de 95 porciento, poder del 80 porciento, factor de revalencia para recien nacidos sanos de 65 porciento, dando un total de 297 pacientes; estos niños fieron ejegidos najo los criterios de inclusión y exclusión descritos. Intervención. Los criterios de inclusión fueron los RN sanos de altura (3600 m.s.n.m.) de ambos sexos. Los criterios de exclusión están referidos a Hipertensión materna, ruptura de membranas fetales por mas de 24 horas, fiebre materna, trabajo de arto mayor de 18 horas, presentaciones anormales. apgar menor a 5, etc. Una vez seleccionados los pacientes, se realizó la toma de muestra de angre de cordón umbilical (lado del niño) a libre caida, en el momento del nacimiento, vetiendo una cantidad de 3 ml. Aproximadamente en un tubo colector que contiene EDTA En laboratorio se mide la serie roja a tavés del hematócrito, hemoglobina y características morfológicas de klos eritrocitos en una placa de tinción utilizando la tinción de May Grunwald-Giensa, que al mismo tiempo nos permite analizar la fórmula Leucocitaria y os agregados plaquetarios. Se realizó el recuento de glóbulos blancos y plaquetas con la técnica UnoPett. Mediciones. Todo el equipo humano que realizó la recolección y el procesamiento de las muestras fue entrenado previamente. Se llenó un cuestionario de antecedentes generales para la identificación del niño recien nacido. En laboratorio se utilizó técnicas y equipos validados para realziar el Hto., Hb y el recuento de las células blancas según normas internacionales.

Efectos del acullico de coca en la prueba de tolerancia a la glucosa / Effects of the chewing coca in the test of tolerance to the flocose

Fueron determinados los efectos de la coca, durante el curso de la tolerancia a la glucosa; en 14 sujetos que acullicaron coca durante 3 horas y media y en 14 sujtos que no acullicaron coca. Ambos grupos son de población aymara, procedentes de comunidades rurales cercanos a la ciudad de La Paz. Los sujetos que no acullicaron coca, presentaron hipoglucemia estadísticamente significativa a los 120 minutos de la prueba, efecto que no se manifestó en los acullicadores de coca. La respuesta de contra regulación hormonal, frente a la hipoglucemia funcionó positivamente en los no acullicadores de coca, puesto que los niveles de glucosa se normalizaron a los 180 minutos de la prueba. Estos aspectos sugieren que los acullicadores de coca, en las grandes alturas no presentan hipoglucemia, por una acción antogónica que ejercen los metabolitos de la coca sobre la insulina. Permitiendo de este modo, una mejor biodisponibilidad del sustrato glucosa en el organismo para su mejor metabolismo frente a un entorno de hipoxia hipobárica, que conlleva muchas veces a situaciones de extrema hipoglucemia

Aspectos metodológicos del control de calidad intralaboratorio en química sanguínea / Methodologic aspects of quality control of a blood chemistry laboratory

El presente artículo trata sobre uno de los roles fundamentales del bioquímico clínico en el equipo de salud, es el de proporcionar datosconfiables y garantizados de los diferentes exámenes procesados en diversos líquidos biológicos con el fin de establecer un diagnóstico, pronóstico y prevencióndel estado de salud. En efecto, el bioquímico clínico al realizar una valoraciónde una determinada molécula pretende encontrar un equilibrio entre lo que sucedeen el interior del organismo y la sensibilidad de métodos químicos in vitrio, los cuales permiten detectar los cambios o transformaciones de ese mundo interior